微流控技術在細胞分析中的應用研究
微流控技術是一種能夠精確控制并操作微尺度流體的技術。近二三十年以來,隨著納米制造技術的成熟以及生化技術對微量液體操控的需要,微流控技術進入了高速發(fā)展期。相較于傳統(tǒng)檢測方法而言,微流控平臺具有反應迅速,高流通量,便于攜帶,自動化潛力高等優(yōu)勢。
自從1998年Burns等研究人員提出了集成多種生物生物、化學分析等功能于一張微小芯片上(即“芯片實驗室”概念)后,微流控技術就表現(xiàn)出了優(yōu)異的臨床檢測、精準醫(yī)療的應用前景。近幾年來,開發(fā)“芯片實驗室”,也就是微型全分析系統(tǒng),已經發(fā)展到物理、微電子、材料、化學、生物、醫(yī)學等多學科交叉的新領域。研制可用于細胞培養(yǎng)、篩選、分析的微流控芯片,也是目前微流體領域的一個研究熱點。
由于微流控技術具有小型化、高通量等特點,使其有潛力能夠利用珍貴稀少的組織細胞樣本進行高通量分析,有力地支持了精準醫(yī)療、個性化醫(yī)療。
Irena等研究人員通過驗證發(fā)現(xiàn),利用數字微流控芯片上進行細胞培養(yǎng)、藥物細胞毒性分析實驗是可行的。在此次實驗中,為了減少細胞表面對細胞及蛋白質的吸附,在液滴中添加了普朗尼克F68,此項操作降低了驅動液滴所需要的電壓,極大地降低了電流對細胞的損害。
Ada等研究人員研制出了PDMS微流體控制芯片,該芯片利用特殊設計的微流體通道,產生含有單細胞的液滴,可在2.4cm×2.4cm大小的芯片上對腫瘤細胞及原腫瘤組織細胞進行藥物篩選。
以微流體控制芯片為基礎的3D細胞培養(yǎng)技術是近年來在生物醫(yī)學領域中應用微流體控制技術的另一類發(fā)展方向。相較于2D細胞培養(yǎng)法,3D環(huán)境下的細胞培養(yǎng)能更好地模擬真實的細胞生長環(huán)境、反應細胞與細胞外基質之間的相互作用。
在Yu等人設計的PDMS芯片上,利用多個平行細胞培養(yǎng)腔和微通道交聯(lián),模擬人體內組織與毛細血管網的相互作用。Raty等研究人員的實驗結果表明,結合多孔細胞培養(yǎng)腔體與PDMS的特殊結構,通過灌注水凝膠形成多個平行的3D細胞培養(yǎng)腔體,完全能夠構建一個完全兼容傳統(tǒng)實驗方法的高通量3D細胞培養(yǎng)微流控制平臺。
除了以細胞培養(yǎng)為基礎的微流控制芯片外,還存在另一個研究焦點,便是能夠替代大型流式細胞儀裝置的微型細胞分選芯片。除考慮熒光標記、微流控芯片大小等因素外,還可對細胞進行介電泳篩選。用介電泳效應和特殊設計的微流道,在非均勻電場中將不同極性的細胞傳遞到不同電場強度的地方,Takahashi等對高通量細胞完成了篩選。除此之外,慣性微流控技術也常用于細胞分選。
Kwon等人利用螺旋微流道,通過微流控制芯片,如死亡細胞、細胞碎片,將細胞培養(yǎng)液中的死亡細胞分離出來,可以進一步應用于灌注細胞的培養(yǎng)。Abdulla等人設計的多個微流道級聯(lián)的微流控芯片,不需要在細胞上做任何標記,就可以實現(xiàn)腫瘤細胞與稀釋全血樣品的分離,從而使循環(huán)中腫瘤細胞的存活率高,便于后續(xù)藥敏篩選等實驗。
近幾年,微流體技術在臨床診斷領域的應用研究,大大推動了現(xiàn)場、實時、精確、個性化醫(yī)療的發(fā)展。雖然目前微流控技術的全面推廣還受到制備工藝復雜、芯片對生物化學組分的吸附等一系列問題的制約,但隨著新材料、新技術、新發(fā)現(xiàn)的不斷涌現(xiàn),各學科的研究者對微流控技術的不斷研究與完善,微流控技術在臨床診斷領域乃至基礎醫(yī)學研究領域的巨大潛力是不容置疑的。
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