未來(lái)使用無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)作為抗體等

高價(jià)值成分的制造平臺(tái)具有巨大前景！

——Paul Freemont

英國(guó)倫敦帝國(guó)理工學(xué)院的合成生物學(xué)家

在我們的細(xì)胞組成中，膜蛋白是一種重要的穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)因子，參與信息和物質(zhì)跨細(xì)胞膜的運(yùn)輸。如果將這一功能運(yùn)用到各種材料設(shè)備上，就可以實(shí)現(xiàn)各種生物功能的平臺(tái)化，例如穿戴傳感器、藥物篩選等。因此，為了利用膜的某些特定的功能，就需要將膜以某種固定的模式與非生物材料連接，如共軛聚合物就是一種標(biāo)準(zhǔn)的生物電子接口材料。但更具挑戰(zhàn)性的一類生物分子與生物電子平臺(tái)的接口是跨膜蛋白，它的難點(diǎn)在于需要在脂雙層膜這種特定的環(huán)境中維持其結(jié)構(gòu)和功能，因此，在電子界面上重新創(chuàng)建適當(dāng)?shù)哪きh(huán)境，以保持跨膜蛋白的活性，一直是該領(lǐng)域的一個(gè)挑戰(zhàn)。

最近美國(guó)康奈爾大學(xué)工程學(xué)院在ACS Synthetic Biology發(fā)表了一篇題為“Cell-Free Synthesis Goes Electric: Dual Optical and Electronic Biosensor via Direct Channel Integration into a Supported Membrane Electrode”的研究，研究者開(kāi)發(fā)出了一種能模擬細(xì)胞膜的特性并提供電子讀數(shù)的合成生物傳感器，有助于更好地了解細(xì)胞生物學(xué)、開(kāi)發(fā)新藥以及在微流控芯片上創(chuàng)建“感覺(jué)器官”。

該研究使用合成生物學(xué)方法重建細(xì)胞膜及其嵌入的蛋白質(zhì)，創(chuàng)造了一種生物傳感器。支撐性脂質(zhì)雙層膜（SLB）可以與各種表面分析技術(shù)兼容，裝配在導(dǎo)電聚合物表面可以實(shí)現(xiàn)跨膜蛋白活性與電子界面的耦合。無(wú)細(xì)胞蛋白合成體系(CFPS)可以對(duì)蛋白質(zhì)合成和反應(yīng)環(huán)境進(jìn)行設(shè)計(jì)，但保留了原生細(xì)胞機(jī)制，可以讓蛋白質(zhì)在產(chǎn)生時(shí)直接插入雙分子層。因此，如果在蛋白質(zhì)合成時(shí)，將合成膜補(bǔ)充到CFPS體系中，則可以一步將跨膜蛋白組裝到合成膜上，避免跨膜蛋白表達(dá)方面的一些困難，最大限度的減少了將跨膜蛋白組裝到SLB上所需的步驟。

根據(jù)這一原理，研究人員在電極上使用傳感器的組件（PEDOT:PSS）薄膜組裝離子通道蛋白，并通過(guò)嵌入的離子通道測(cè)量穿過(guò)支撐膜的離子通量。因此，導(dǎo)電聚合物能夠?qū)崿F(xiàn)電氣讀數(shù)，由于傳感器的組件是透明的，可以用熒光顯微鏡實(shí)現(xiàn)光學(xué)測(cè)量，使其成為雙模態(tài)傳感器(如下圖)，觀察蛋白質(zhì)本身在細(xì)胞過(guò)程中會(huì)發(fā)生什么，還記錄電子活動(dòng)，通過(guò)巧妙的電路設(shè)計(jì)來(lái)觀察蛋白質(zhì)是如何運(yùn)作的。

首先，在該傳感器的組裝過(guò)程中，為了最大化跨膜離子通道生物傳感平臺(tái)的靈敏度，需要在低阻抗的電極表面上成功形成SLB。PEDOT:PSS是一種生物相容的導(dǎo)電聚合物，是一種低阻抗的電極表面。然而PEDOT:PSS在沒(méi)有陽(yáng)離子電解質(zhì)涂層的情況下，其作為陰離子脂質(zhì)體并不能破裂并自組裝成SLB。所以首先要先在PEDOT:PSS表面進(jìn)行陽(yáng)離子電解質(zhì)涂層，進(jìn)而SLB在上面組裝，然后使用一個(gè)研究充分的細(xì)菌跨膜蛋白(MscL)通過(guò)無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成反應(yīng)，繞過(guò)純化和重建，將可移動(dòng)膜蛋白摻入這些裝置中的SLB。

進(jìn)一步通過(guò)測(cè)量蛋白質(zhì)的兩個(gè)品質(zhì)因數(shù):取向和遷移率，證實(shí)合成蛋白的狀態(tài)以及可移動(dòng)SLB的存在。一旦器件形成，MscL在雙層中的方向和移動(dòng)性得到確認(rèn)，通過(guò)電學(xué)方法可以評(píng)估它的離子流活性。在該研究中，通過(guò)標(biāo)記某些氨基酸測(cè)量蛋白質(zhì)的取向和遷移，隨著反應(yīng)進(jìn)行時(shí)出現(xiàn)的熒光來(lái)觀察蛋白質(zhì)的合成，進(jìn)一步將氨基酸切除并觀察熒光損失情況來(lái)評(píng)估蛋白質(zhì)的取向。研究發(fā)現(xiàn)標(biāo)記蛋白MscL主要以同一個(gè)方向共翻譯合成到SLB中。在確定組合蛋白質(zhì)的方向后，使用單顆粒追蹤分析來(lái)評(píng)估這些液體SLB中的蛋白質(zhì)流動(dòng)性，其圖像和移動(dòng)粒子的軌跡如下圖所示，發(fā)現(xiàn)大約40%的蛋白質(zhì)具有移動(dòng)性。

在確認(rèn)了目標(biāo)蛋白的插入、取向和遷移率之后，使用電化學(xué)阻抗譜從功能上表征生物傳感器的性能。通過(guò)使用一種MscL蛋白的突變體來(lái)評(píng)估蛋白反應(yīng)的特異性，這種突變體會(huì)對(duì)化學(xué)刺激產(chǎn)生反應(yīng)，而野生型的則不會(huì)。將MscL單獨(dú)組裝帶電極上，而突變型MscL轉(zhuǎn)化為SLB進(jìn)行組裝，兩種情況的阻抗譜沒(méi)有很大的差異，都向更高的電阻值移動(dòng)。而將他們通過(guò)CFPS組裝SLB后，暴露于化學(xué)激活劑中發(fā)現(xiàn)，野生型基本沒(méi)有反應(yīng)，突變型則觸發(fā)突變體的通道開(kāi)放，從而降低電阻，表明蛋白質(zhì)被激活，并且通道具有功能特異性。

研究人員稱，這是利用跨膜蛋白的無(wú)細(xì)胞合成生物傳感器的首次演示 。他們將不必在細(xì)胞中生長(zhǎng)蛋白質(zhì)，然后再將它們嵌入膜平臺(tái)。相反，他們可直接從DNA進(jìn)行合成。這種無(wú)障礙的制造方式將進(jìn)一步擴(kuò)大生物傳感平臺(tái)的采用和創(chuàng)新。通過(guò)該配置可以為任何電氣配置提供定制的電路設(shè)計(jì)，并且使囊泡融合技術(shù)非常易于使用。該技術(shù)還可以應(yīng)用于廣泛的跨膜蛋白，創(chuàng)造出一種強(qiáng)大的傳感器，能夠檢測(cè)范圍廣泛的不同分子，進(jìn)而應(yīng)用于醫(yī)療、制造、制藥和研究等領(lǐng)域。

這種生物傳感器只是合成生物學(xué)龐大領(lǐng)域的一個(gè)分支，合成物學(xué)作為一門(mén)新興交叉的前沿科學(xué)，在生命科學(xué)、能源科技、醫(yī)療健康、材料化工和農(nóng)業(yè)科技等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。目前，合成生物學(xué)已被廣泛應(yīng)用于各種產(chǎn)業(yè)，在推動(dòng)科學(xué)革命的同時(shí)，合成生物技術(shù)正快速向?qū)嵱没?、產(chǎn)業(yè)化方向發(fā)展。

合成生物學(xué)領(lǐng)域的這些研究成果也使人們相信，合成生物學(xué)的研究正在或已經(jīng)進(jìn)入一個(gè)爆炸性發(fā)展時(shí)期。它的發(fā)展將會(huì)像20世紀(jì)電子工程的發(fā)展一樣給人類社會(huì)帶來(lái)深刻的變革。

參考文獻(xiàn)：Z. A. Manzer, S. Ghosh, A. Roy, M. L. Jacobs, J. Carten, N. P. Kamat and S. Daniel, Cell-Free Synthesis Goes Electric: Dual Optical and Electronic Biosensor via Direct Channel Integration into a Supported Membrane Electrode, ACS Synthetic Biology, 2023.

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