PCR概念

聚合酶鏈反應(yīng)(基因擴(kuò)增)：基本原理 類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程，在體外特異性擴(kuò)增DNA片段的一種技術(shù)。

PCR的應(yīng)用領(lǐng)域

1、遺傳病和某些疑難病的診斷

2、病原體的檢測(cè)。某些惡性疾病一般用微生物學(xué)、生化和免疫 學(xué)技術(shù)無(wú)法查出病原體時(shí)，可用PCR來(lái)檢查。

3、法醫(yī)和刑偵鑒定。

4、癌基因的檢查。

5、基因探針的制備。

6、基因組測(cè)序、染色體巡視。

7、cDNA庫(kù)的構(gòu)建。

8、基因突變的分析和定位誘變。

9、DNA重組。

10、基因的分享和克隆。

標(biāo)準(zhǔn)的PCR過(guò)程分為三步

DNA變性

（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA

退火

（60℃-65℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。

延伸

（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，從引物的3′端開(kāi)始以從5′→3′端的方向延伸，合成與模板互補(bǔ)的DNA鏈。

PCR儀的分類(lèi)

根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等幾類(lèi)。

普通PCR儀

一般把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀，稱(chēng)之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運(yùn)行。主要是用作簡(jiǎn)單的，對(duì)目的基因退火溫度的擴(kuò)增。

原位PCR儀

用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀。如病原基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等?？杀３旨?xì)胞或組織的完整性，使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞的靶DNA所在的位置進(jìn)行基因擴(kuò)增。不但可以檢測(cè)到靶DNA，還能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置。于分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過(guò)程及病理的轉(zhuǎn)變有著重大的實(shí)用價(jià)值。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

在普通PCR儀基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，就成了熒光定量PCR。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR擴(kuò)增原理相同，只是在PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記，使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。

熒光定量PCR儀有單通道，雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候，選用單通道；有多種熒光標(biāo)記的時(shí)候使用多通道。單通道也可以檢測(cè)多熒光的標(biāo)記和目的基因表達(dá)產(chǎn)物，因?yàn)橐淮沃荒軝z測(cè)一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò)增才能檢測(cè)完不同的目的基因片段的量。

進(jìn)口品牌

美國(guó)ABI、美國(guó)Labnet萊伯特、美國(guó)Bio-rad伯樂(lè)、英國(guó)Genetech、英國(guó)Techne、德國(guó)Eppendorf艾本德、新加坡Esco藝思高、日本TaKaRa、日本ASTEC、澳大利亞Corbett柯柏特、德國(guó)Jena耶拿、德國(guó)biometra、德國(guó)BOECO、英國(guó)CLEAVER科麗沃、瑞士ROCHE羅氏、英國(guó)Quanta、德國(guó)PEQLAB、荷蘭Creacon、美國(guó)Cepheid、美國(guó)Thermo熱電。

目前進(jìn)口品牌中美國(guó)ABI，美國(guó)labnet，美國(guó)Bio-rad，日本TaKaRa，英國(guó)Techne，德國(guó)Eppendorf六大品牌占有率比較高。

根據(jù)近年來(lái)銷(xiāo)量分析，其中美國(guó)ABI除了9700型普通PCR基因擴(kuò)增儀和2720型基因擴(kuò)增儀外，新推出的高精確性的Veriti梯度PCR儀，也是所有進(jìn)口品牌梯度PCR儀中最受客戶認(rèn)可的一款，是近兩年來(lái)銷(xiāo)量較高一款PCR儀；

其次是美國(guó)Bio-rad；

日本TaKaRa和美國(guó)Labnet梯度PCR儀，價(jià)格相對(duì)進(jìn)口品牌中比較便宜，質(zhì)量和性能也比較穩(wěn)定，從而深廣大客戶的認(rèn)可，他們的銷(xiāo)售成交價(jià)在45000-50000左右，而其它同性能價(jià)格的儀器價(jià)格在，60000-80000元，所以近年來(lái)市場(chǎng)的占有率呈上升的趨勢(shì)；

德國(guó)Eppendorf和美國(guó)Bio-rad是以直銷(xiāo)的模式銷(xiāo)售，因其壟斷直銷(xiāo)方式，外面的經(jīng)銷(xiāo)商或者當(dāng)?shù)氐慕?jīng)銷(xiāo)商無(wú)法進(jìn)去競(jìng)爭(zhēng)，所以相同性能的產(chǎn)品價(jià)格相對(duì)其他品牌要高很多，成交價(jià)格一般在7-9萬(wàn)元左右，市場(chǎng)占有率相對(duì)有所下降；

英 國(guó)Techne在國(guó)內(nèi)生產(chǎn)，價(jià)格相對(duì)進(jìn)口品牌中要低很多，銷(xiāo)量有所上升，市場(chǎng)占有率也上升，價(jià)格在35000-40000元左右。

來(lái) 源： 醫(yī)療維修幫、計(jì)量與質(zhì)控；Ths to @王寧.

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