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基于 LAMP 的微流控平臺(tái)應(yīng)用之單基因檢測(cè)

傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增芯片技術(shù)需要良好的溫控系統(tǒng),且 95℃高溫對(duì)芯片的密封性及內(nèi)置試劑的性能都會(huì)有影響。為了克服常規(guī) PCR 高溫的不利影響,核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)隨之發(fā)展起來(lái)。LAMP 是一種等溫?cái)U(kuò)增方法,在 65的溫度下運(yùn)行,它的高靈敏性和穩(wěn)定性、低運(yùn)行成本和設(shè)備的簡(jiǎn)單性使其成為在低資源環(huán)境下遺傳分析最有前途的技術(shù)之一?,F(xiàn)在 LAMP 微流控平臺(tái)已被用于各種 POC 檢測(cè)。

2016年,Sayad等研究開(kāi)發(fā)了基于微流體盤(pán)的LAMP芯片,集成了樣品制備和檢測(cè)功能。該圓盤(pán)芯片由兩層聚甲基丙烯酸甲酯層和夾在中間的壓敏膠膜材料組成。實(shí)驗(yàn)時(shí),首先將 LAMP 試劑和含有DNA 模板的溶液預(yù)先裝載到各自的腔室中,并密封在芯片內(nèi),隨后通過(guò)調(diào)節(jié)圓盤(pán)的轉(zhuǎn)速、改變離心力來(lái)實(shí)現(xiàn)溶液混合。

使用熱風(fēng)槍將芯片保持在高溫下,并由紅外攝像機(jī)監(jiān)控芯片溫度。通過(guò)監(jiān)控反應(yīng)體系中 SYBR Green I 染料的熒光值變化,實(shí)現(xiàn)可視化檢測(cè),其最低檢測(cè)限可達(dá)到 5 pg μL-1 。由于LAMP 反應(yīng)所需恒溫的溫度較低,一旦LAMP 試劑和核酸模板混合后便可立即進(jìn)入擴(kuò)增反應(yīng);在實(shí)際操作中,體系配置、混合、離心、放入反應(yīng)儀器等過(guò)程容易造成較大差異,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性、一致性欠佳。

而該體系的優(yōu)點(diǎn)就在于在恒溫反應(yīng)前試劑與模板各自分離,一旦混合后即可處于溫度及信號(hào)收集器的監(jiān)控中,可控性好、信號(hào)收集及時(shí)準(zhǔn)確,但該系統(tǒng)需配置大體積溫度和磁盤(pán)旋轉(zhuǎn)控制系統(tǒng),導(dǎo)致設(shè)備體積較大,成為 POCT 應(yīng)用的阻礙。LAMP 與傳統(tǒng) PCR 技術(shù)相比,更節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間,優(yōu)勢(shì)明顯,因此研究者們不斷探索 LAMP-微流控芯片在 POCT 的應(yīng)用。2019 年,aterfifield等系統(tǒng)評(píng)價(jià)了基于 LAMP 微流控平臺(tái)診斷兒童感染性腦膜炎球菌疾病的準(zhǔn)確性,結(jié)果顯示出高度準(zhǔn)確性(敏感性0.841.0和特異性0.941.0)。

2020年,Augustine等建立了一種快速、敏感、特異、經(jīng)濟(jì)有效的檢測(cè)COVID-19的LAMP方法,并提出構(gòu)建 LAMP微流控檢測(cè)平臺(tái),并應(yīng)用于新型冠狀病毒POC檢測(cè),前景巨大。



標(biāo)簽:   微流體