利用微流控技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用研究
微流控技術(shù)已被用于化學(xué)和生物研究的許多領(lǐng)域。該技術(shù)的一個有價值的應(yīng)用是研究細(xì)胞生物學(xué)中的蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用。這對于深入了解細(xì)胞信號傳導(dǎo)和基因調(diào)控途徑以進(jìn)一步了解生物過程至關(guān)重要。
這種高通量技術(shù)可以實時快速,經(jīng)濟地檢測許多特定蛋白質(zhì)相互作用。參數(shù)可以很容易地調(diào)整,并且過程可以自動化。
不需要昂貴的標(biāo)記蛋白質(zhì)和制備試劑的過程,也不需要許多傳統(tǒng)技術(shù)(如Western Blotting和ELISA)所需要的較長的檢測時間。這些優(yōu)點使得微流控技術(shù)成為蛋白質(zhì)相互作用研究的一項備受期待的技術(shù)。
什么是微流控芯片?
微流控芯片用于蛋白質(zhì)相互作用的研究,以及細(xì)胞生物學(xué)、臨床診斷和藥物的其他應(yīng)用。它們包含多個相互連接的微通道,通過這些微通道注入和操縱微小體積的流體,可以對通道微環(huán)境進(jìn)行精確控制。在細(xì)胞生物學(xué)中,它允許在單個細(xì)胞尺度上控制環(huán)境參數(shù)。
流體在管道網(wǎng)絡(luò)中的流動可以由多種系統(tǒng)引起,如壓力控制器、注射器和靜水壓力。生化刺激的濃度梯度可以被設(shè)計成通過通道網(wǎng)絡(luò)來理解單個細(xì)胞的反應(yīng)。
微流控芯片傳統(tǒng)上是由硅或玻璃制成的,但PDMS等聚合物也越來越受歡迎。PDMS具有光學(xué)透明性、生物相容性、易于成型和透氣性。然而,它不允許加入電極,因此在這種情況下需要將其覆蓋在玻片上。
蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用研究
對于蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用研究,研究正在朝著設(shè)計高度專業(yè)化的微流體裝置的方向發(fā)展,以滿足檢測的需要。設(shè)計了一種用于研究廣泛的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的裝置,包括糖蛋白-糖蛋白和抗原-抗體相互作用。
該方法涉及將特定蛋白質(zhì)受體或抗體固定在電極之間的各個通道的表面上。將涂有所選蛋白質(zhì)的珠子注入芯片中并移動通過通道直至它們與靶蛋白質(zhì)結(jié)合。
在結(jié)合時,珠子封閉微通道,導(dǎo)致電阻和電流阻抗。這由電極檢測,允許鑒定和定量蛋白質(zhì)相互作用。
用這種方法檢測蛋白粘附也可以評估這些結(jié)合的強度和特異性。這是通過測量從通道表面分離珠子所需的流量來實現(xiàn)的。該方法的另一個優(yōu)點是利用多個傳感器可以識別多種蛋白質(zhì)相互作用。
另一種方法叫做PING(蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)生成),已經(jīng)被用來研究發(fā)生在細(xì)菌基因組中的蛋白質(zhì)相互作用。該微流體裝置將克隆庫中的蛋白質(zhì)固定為“誘餌”蛋白質(zhì),熒光標(biāo)記的“獵物”蛋白質(zhì)與之結(jié)合,從而進(jìn)行識別。
該方法是研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的一個很好的模板,包括蛋白質(zhì)- rna和蛋白質(zhì)- dna粘附。單個芯片有潛力提供基因組或蛋白質(zhì)組相互作用的完整分析。
微流體裝置是一種日益流行的研究蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù),它可能會取代其他耗時、費力和昂貴的方法。
研究證實,重新設(shè)計器件的結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分可以顯著提高其性能和對相互作用的敏感性。這表明微流控裝置的進(jìn)一步完善將對蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的研究具有重要的意義。